CCK-8操作说明和检测步骤

在细胞生物学研究中，CCK-8试剂是一种广泛使用的工具，用于评估细胞活性和代谢状态。它通过检测细胞中的脱氢酶活性来间接反映细胞的存活情况。本文将详细介绍CCK-8的操作方法和检测步骤，帮助您更高效地完成实验。

一、实验准备

1. 材料准备

- CCK-8试剂盒（包含CCK-8溶液、DMEM培养基等）。

- 待测细胞样品。

- 96孔板或其他适合细胞培养的容器。

2. 设备准备

- 高精度移液器。

- 微量离心机。

- 酶标仪或分光光度计。

二、实验步骤

1. 细胞接种

- 将适量细胞悬液加入96孔板中，每孔接种约5000-10000个细胞。

- 在37℃、5% CO₂条件下孵育过夜，确保细胞贴壁生长。

2. 样品处理

- 根据实验需求，对细胞进行不同处理（如药物刺激、基因编辑等）。

- 每组设置重复孔，确保数据可靠性。

3. 添加CCK-8试剂

- 移除培养基，每孔加入100μL新鲜配制的CCK-8溶液。

- 轻轻振荡混匀，避免产生气泡。

4. 培养与反应

- 将96孔板置于培养箱中，避光孵育1-4小时。

- 孵育时间可根据实验需求调整，通常以OD值达到最佳范围为准。

5. 数据采集

- 使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值）。

- 对空白对照组进行校正，计算相对细胞活力。

三、注意事项

- 实验过程中需严格控制温度和光照条件，避免影响试剂活性。

- 不同细胞类型可能需要优化CCK-8的使用浓度和孵育时间。

- 测定前应确保酶标仪已校准，以获得准确的数据结果。

通过以上步骤，您可以顺利完成CCK-8实验，并获得可靠的细胞活力数据。希望本文能为您的科研工作提供有效指导！

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